A reagens illékonyodásának részletes magyarázata a PCR kísérletekben

A reagens illékonyításának részletes magyarázata a PCR kísérletekben.

A PCR -kísérletben, a reakciórendszer hozzáadása után, óvatosan lefedjük a fedelet, és többször megerősítjük, hogy a fedél bezáródik, hogy elkerüljük a reagensek illékonyodását. De néha kétségeink is vannak: megerősítettük, hogy a fedél szorosan zárva van, de a kísérlet befejezése után a reagens továbbra is elpárolog. mi az ok?

Valójában a reagens illékonyodása az egyik leggyakoribb probléma a PCR -kísérletekben, és számos tényező befolyásolja a reagens illékonyodását.

A párolgás erre a PCR -kísérlet során a reakcióoldat magas hőmérsékleten elpárolog, majd kondenzálódik a palackfalon vagy a felső burkolaton, hogy vízt vagy vízcseppeket képezzenek, vagy közvetlenül a palack kupak vagy film légrésről túlfolyik, ami az eredményül a reakcióoldat koncentrációjának változásában. Változások, a reakcióoldat mennyisége csökkent, és néhányuk még szárazra is elpárolog, és érvénytelen kísérleteket eredményez.

1. Forró fedél nyomás, hőmérséklet

A PCR kísérletekben általában melegítjük a fedelet, hogy megakadályozzuk a reagens gőz kondenzációját. A melegített fedél hőmérséklete általában magasabb, mint a reakcióoldatának a gőzök kondenzációjának megakadályozása érdekében.

A termikus ciklusos fűtőfedelek nagyjából eloszthatók a következő négy típusra: nem állítható fűtőfedelek, állítható fűtési fedelek, adaptív fűtési fedelek és automatikus fűtőfedők. A beállítható fűtött fedél ujjleni tömörítéssel rendelkezik. Ha nem szorosan szorítják, akkor a reagensek elpárolognak. Az él párolgása minimalizálható, ha növeli a fűtött fedélre gyakorolt ​​nyomást. Időnként a túlzottan megcsíphetik a csövet és elcsavarhatják a gombot. Normál körülmények között az elektromos intelligens fűtési burkolat automatikusan felismeri a különböző magasságú fogyóeszközöket, automatikusan összenyomja a fogyóeszközöket, és a nyomás egységes és állandó, ezáltal csökkentve a reagensek párolgását és a kézi hibákat, valamint a kísérleti pontosság és megismételhetőség javítását.

2. A fogyóeszközök deformációja

A gőzszivárgáshoz a legtöbb ember úgy gondolja, hogy a forró fedél nyomás nem elég. A forró fedél nyomása nagyon fontos, de ez csak egy szempont. Valójában a fogyóeszközök is nagyon fontosak.

A PCR nyíláslemezeket általában műanyag anyagokból készítik, amelyek melegítés után nagymértékben kibővülnek és deformálódnak. A PCR -nyílás lemezének elhelyezéséhez használt PCR fémbázis hőtágulási sebessége rendkívül alacsony, és a PCR -nyílás lemez nem tud normálisan a sík mentén a termikus tágulás után. A duzzadási állapot miatt a felső hőtakaró nem képes teljes mértékben érintkezni a PCR -nyílás lemez felületével, ami egyenetlen hőmérsékletet és nyomást eredményez, és a PCR -nyílás szélén reagensek elpárologtatása és a PCR detektálási hatása befolyásolja.

3. A fogyóeszközök nincsenek szorosan lezárva

A termikus fedél és a fogyóeszközök szorossága nem azt jelenti, hogy a PCR csősapka szorosan zárva van, és a PCR kút lemez minősége egyenetlen. Kiváló minőségű fogyóeszközök, a fúvóka és a fedél felülete sima, és a doboz burkolata mögött lévő tömítés jó, és nem könnyű szivárogni. Az alacsonyabb szintű fogyóeszközök egyenetlen kifolyókkal és sugárirányú vonalakkal rendelkeznek, amelyek könnyen szivárgást okozhatnak, vagy akár kiszáradhatnak.

Ezért a PCR kísérletekben próbáljon meg kiváló minőségű és megfelelő fogyóeszközöket választani. Ugyanakkor a reakciórendszer kibővíthető, hogy minimalizálja a rendszer elpárologtatásának a reakcióra gyakorolt ​​hatását.