Zsákó és szennyeződés kérdései a többszörös sejttenyésztő lemezekben

Többgömbös sejttenyésztő lemezek betöltése és kezelése:

A sejttenyésztő lemez a szigorú asepsis elvét is követi a sejtek művelete során. Minden műveletnek szabványosítottnak és tudományosnak kell lennie, és nem okoz további hatást a sejtek növekedésére. A leggyakoribb probléma az, hogy miként lehet biztosítani a sejtek egységességét a minta hozzáadása után, és minimalizálhatjuk a tápközeg megváltoztatásának a sejtek növekedési állapotára gyakorolt ​​hatását.

kérdez:
A 96 és a 24 hüvelykes tenyésztési lemezek vagy a Petri-csészék fedelei nagyon lazák, ami kényelmes a szellőzéshez, de a baktériumok, penész és más szennyező anyagok is becsúsznak?

válasz:
A fedél nagyon laza, amely a félig nyitott kultúrához tartozik, és ennek célja a szellőztetés (valójában az, hogy a CO2-t a kulturális ételen kívüli tenyésztésen kívül cserélje a tenyésztési ételekkel, és megőrizze a kultúra pH-értékét közepes).
Mindennek vannak előnyei és hátrányai, ami természetesen növeli a szennyezés lehetőségét. Ezenkívül ez az edényben lévő folyadék elpárologását okozza, ami figyelemre méltó a gyógyszerek pontos adagolásához. Ezért a következő két intézkedésre van szükség: a. Az inkubátorban levő levegőnek tisztanak kell lennie (rendszeres ultraibolya fény, alkoholos súrolás, és az inkubátort a lehető legkevésbé kell kinyitni és bezárni) b. Az inkubátorban lévő páratartalmat mindig 100% -on kell tartani (a mosogatót steril desztillált vízzel az inkubátorba helyezzük).
Csakúgy, mint egy Petri-csésze, ez is egy fejjel lefelé tartó fedéllel rendelkező konténer, és nem szennyezi. Elsősorban a fedél "L" széle által generált légáramlás negatív nyomása miatt vannak olyan mikroorganizmusok, amelyek a porhoz vannak rögzítve, és a légáramlás által hordozott por nem haladhat át a fedél szélén, amely negatív nyomást generál. A szellőztetési hatás csak a levegő diffúzióján keresztül történik, és nem jön létre légáramlás, tehát csak lélegzik, és nem hatol át a baktériumokba.

kérdez:
A 24 üregű lemez segítségével néhány kutakban vannak műveletek (az ultra-tiszta padon), és vannak olyan sejtek, amelyeket más kutakban kell tenyészteni. Aggódom, hogy ez szennyeződést okoz. Nem tudom, mire kell figyelni?

válasz:
Ha a műveletet az ultra-tiszta padon szabványosítják, akkor rendben kell lennie. Úgy gondolom, hogy teljes mértékben kihasználhatja a kulturális tányér borítását, megpróbálhatja csak a működtetendő lyukakat feltárni, és a többi lyuk fedelével fedheti le.
Használat előtt mérlegelje átfogóan, és teljes mértékben kihasználja az összes lyukat; Ha csak néhány lyukat kell használnia, akkor csak egy oldalt használhat, és a többit fedővel fedheti le. Szoktam, hogy először a megfelelő lyukat használom (kényelmes mintákat adni a jobb kézhez).

Működés közben használjon néhány üveglemezet a deszka egyik oldalának emeléséhez, ne nyissa ki teljesen a fedelet, általában nincs probléma.
Egyenetlen sejt -eloszlás és megoldások

kérdez:
A sejteket a tenyésztési lemezen oltják be, és a sejtek mindig a perifériás részben gyűlnek össze, hogyan kell kezelni?

válasz:
Megkérdezhetem, hogyan keverednek a sejtjeidet? Pipettázza vagy megrázza a kulturális lemezt? Ha ez az utóbbi, és ha körben megrázza, akkor nagyon valószínű, hogy a sejteket a centrifugális erő miatt a perifériás részre dobják, ami kevesebb sejtet eredményez a közepén. Több mint négy hét!
Itt van egy jó módszer: Mielőtt a vetőmagtenyésztést megnövelné, tegye a tenyészlemezt az inkubátorba néhány órás telítettségre, majd vegye ki. Az erőnek könnyűnek kell lennie a sejtek ültetésekor. A lassan történő hozzáadás lehetővé teszi a sejtszuszpenzió áramlását a lemez kútjaiba, és a tenyésztett sejtek alapvetően egyenletesen növekednek. Ne felejtse el, hogy soha ne rázza meg rázógéppel, különben a cellái összeállnak, mint mondtad.
Minél kisebb a lyuk átmérője a tenyészlemeznek, annál nyilvánvalóbb ez a jelenség. Ez a jelenség elkerülhetetlen a 24 és 96 üregű lemezeknél, mivel a folyadék a falhoz ragaszkodik, így a kút tenyésztési oldata nem képez folyékony szintet, hanem a periféria magas, akárcsak egy konkáv tükör. E kétféle nyíláslemez használatakor azonban nem lehet elegendő mennyiségű tenyésztési oldatot hozzáadni a további beavatkozás szükségessége miatt, így a cellák a "Edge Collection" -nek jelennek meg a tenyésztési megoldással együtt. Attól függ, hogy milyen mutatókat kell megfigyelnie. Ha ez MTT, akkor az immunhisztokémia befolyásolja a sejtréteg miatti eredményeket.
A sejtek emésztésekor figyeljen az egyenletes pipettázásra, hogy elkerülje a sejtcsomókat, és elegendőnek kell lennie a kútban lévő tenyésztési oldat mennyiségének. Általában adjon hozzá elegendő tenyésztési oldatot oltásakor, és az intervenció hozzáadásakor egyszer változtassa meg a megoldást. Az intervenciós oldathoz hozzáadott tenyésztési oldat mennyisége megegyezik a tenyésztési oldat mennyiségével az oltás idején, ebben az esetben a "élkészlet" jelensége javul, így kipróbálhatja.

kérdez:
Amit tettem, a plakkképződés kísérlete volt. A legjobb, ha a sejteket egyenletes rétegben terjeszti. A legtöbb lyuk rendben van, amikor a vírust beoltják, és néhányuk nem egységes. Nagy különbségek vannak a sejtcsoportban. Szeretném megkérdezni, hogy milyen módszert használ a cellák hozzáadásakor?

válasz:
Fontos, hogy az emésztés után egysejtű szuszpenzióba pipettáljon a sejteket! Győződjön meg arról, hogy az egyes kútban lévő sejtek száma következetes -e a lemez felosztásakor!
Természetesen vannak feldolgozási tényezők is. A kutak közötti párhuzamosság szintén nagyon fontos. Például, amikor gyógyszert ad, keverje össze a gyógyszert a hígítás után, hogy megbizonyosodjon arról, hogy az egyes kútok koncentrációja következetes legyen!
Ezenkívül a sejtek és gyógyszerek hozzáadásakor a tesztcsoportot és a kontrollcsoportot felváltva kell hozzáadni, hogy elkerüljék a sejtsűrűség és a gyógyszerkoncentráció különbségét, amelyet a minták hozzáadása okozott!

kérdez:
A fújás már egyenletes, de a deszka, a 6 lyuk és a 24 lyuk mindig kissé egyenetlen, és kissé koncentrált a közepén. Sőt, nyilvánvaló, hogy a számlálás megtörténik, és egy -két nap elteltével az egyes lyukak sűrűsége eltérő, ami befolyásolja a detektálást. Van egy jó út?

válasz:
Ha Pasteur pipettát használ, ne szopjon túl sokat, mert a pipettában lévő cellák automatikusan elsüllyednek, gyakran az első néhány lyukban a sejtek száma nagy, és a sejtszuszpenzió gyakran egyenletes, és a folyékony akarat akarat Kövesse az S-alakú útvonalat.
Ha pipettát használ, akkor a tippeket fel kell dolgozni és eltávolítani a sejtek károsodásának elkerülése érdekében, hogy a folyadék minden egyes része egy kúthoz kapcsolódik. Pontosabb az egy-egy lyuk hozzáadásával a tipp. Hanem figyeljen a felfüggesztés keverésére is.

A párhuzamos csoport beállításához N -nek elég nagynak kell lennie (kiszámíthatja).

A borítás után ne rázza meg, mivel a rázás miatt a sejtek a központ felé aggregálódnak. A legjobb, ha egyszer deszkázunk.

A Yongyue Medical porózus sejttenyésztési lemez mindig a minőség -ellenőrzést a vállalkozás életének tekintette, és folytatta a vállalati versenyképesség folyamatos fejlesztését. A társaság mindig betartja a törvények és rendeletek betartási szellemének vállalkozási szellemét, szigorúan az önfegyelemmel, enyhén és merész a felelősségvállalásnak a működési, fenntartva és kibővítve a piacot, kiváló minőségű és kiváló szolgáltatással, valamint a Piac fenntartásával és kibővítésével, valamint a Piac fenntartásával és kibővítésével. Az ügyfelek igényei a legnagyobb mértékben. - A fejlesztési célunk az ügyfelekkel való haszonnal jár. Yongyue Medical! A megbízható partnered. Hajlandóak vagyunk őszintén együttműködni veled a jobb jövő megteremtése érdekében.